Un kit de testare a adenozin deaminazei de înaltă calitate

Adenozin Deaminaza (ADA) este o enzimă naturală care este implicată în răspunsul imun. Funcția difosfatului de adenozină (ADP) este de a activa celulele și de a efectua permeabilizarea membranei și efectul citotoxic. Adenozina a fost identificată ca fiind unul dintre cei mai importanți aminoacizi necesari pentru activitatea normală a creierului uman. Este sintetizat de ficat și este distribuit în plasma sanguină prin acțiuni ale sistemului imunitar. Adenozin Difosfat este un purtător al materialului genetic antiviral. În Biomedical Expo, kitul ADA Activity Assay va fi utilizat în combinație cu BioVision Cytokine menționat anterior.

Adenozin difosfat (ADP) este un purtător al factorului de creștere a limfocitelor T. În BioVision Cytokine, adenozin deaminaza (ADO) este extrasă din rinichiul disecat și analizată utilizând un test automat spectrofotometric disponibil comercial. Reactivul a fost pre-tratat cu anti-fosfo-dGlucoză (PI) pentru a preveni reacția sa cu analitul.

Compoziția kitului AIDA Activity Assay, disponibil comercial, include două componente principale - reactivul și echipamentul de laborator. Reactivii conținuți în trusa de analiză a activității Aida includ cocktail de enzime purificate (Sigma-FCA). Echipamentul de laborator constă dintr-un scanner cu microplăci (montat în spatele unei lame de microscop din sticlă), articole din sticlă, registru de rezultate cu curbe standard și sticla de clătire. Înainte de utilizare, mostrele din trusa de testare a activității Aida trebuie spălate cu apă declorinată. Utilizarea reactivului și a echipamentului de laborator nu este limitată doar la teste de laborator.

Pentru a examina capacitatea trusei de testare a activității Aida de a măsura activitatea totală a adenozin deaminazei, au fost efectuate mai multe sesiuni experimentale. Prima sesiune a constat în patru zile de urmărire manuală. O sută cincizeci de microlitri de Aida-GFP au fost dizolvați în apă de la robinet și amestecați cu soluție salină tamponată cu fosfat. După douăzeci de minute, probele au fost testate pe ecranul de echilibru de masă HPLC.

A doua sesiune a inclus două zile suplimentare de urmărire manuală. Probele au fost injectate pe caseta curbă timp de două ore, așa cum s-a descris mai sus. A treia sesiune a inclus trei zile suplimentare de urmărire manuală în aceeași cameră, urmate de patru ore de injecții subcutanate de adenozin deaminază (ADCA). Proba de sânge a fost prelevată după o oră pentru analiză.

Pentru testarea salivei, cinci sute de microlitri de soluții standard de deaminază și trandafir de pH au fost amestecați într-un punch nesteril. Porcilor li s-a permis să bea o gamă întreagă de lichide, de la apă plată la sifon dietetic, după dorință. Când soluțiile standard au atins punctul de fierbere, s-a introdus un picurător cu un volum predeterminat de salivă și s-a măsurat activitatea adenozin deaminazei.

Ultimul grup de șase probe a fost analizat folosind un kit de analiză a fosforimidazoleaminei pe bază de saliva disponibil comercial (Saproflavil; Thermo Instruments). În acest set de teste, o singură picătură de reactiv fosforimidazoleamină/salivar ada a fost amestecată cu un volum de apă de la robinet și pulberea uscată a fost adăugată la probe. După treizeci de minute, a fost prelevată oa doua probă din aceeași probă. În acest caz, activitatea în saliva a fost măsurată imediat. Trusa a fost concepută special pentru măsurarea activității acidului din saliva umană. După cum era de așteptat, a existat o cantitate semnificativă de activitate care a putut fi detectată.

După cum era de așteptat, ambele analizoare au produs rezultate similare. Natura extrem de specifică a analizei Tomografiei cu emisie de pozitroni salivare (SPECT), împreună cu metodologia extrem de sensibilă (detecție ridicată a fluidului intra-oral) a dus la o acuratețe constantă ridicată și măsurători semnificative. Personalul de laborator folosit pentru proceduri a fost toți experți în domeniu. Nu a existat nicio dovadă de contaminare sau vreun fel de eroare de experiment. Subiecții testați și-au dat consimțământul informat și procedura a urmat recomandările stabilite de Asociația Americană a Endocrinologilor Clinici. În general, rezultatele obținute din trusa de testare a adenozinei deaminazei au arătat o reproductibilitate bună, ceea ce a fost confirmat de studii separate de la laboratoare clinice independente.